Ang usa ka fluorescence filter usa ka hinungdanon nga sangkap sa fluorescence microscope. Ang usa ka tipikal nga sistema adunay tulo ka sukaranan nga mga pagsala: usa ka filter sa pagpukaw, usa ka filter sa emisyon ug usa ka salamin nga dichroic. Kasagaran sila giputos sa usa ka cube aron ang grupo isulod sa mikroskopyo.
Giunsa pagtrabaho ang usa ka fluorescence filter?
Filter sa Kahinam
Ang mga filter sa eksaytasyon nagpadala sa kahayag sa usa ka piho nga wavelength ug nagbabag sa ubang mga wavelength. Mahimo kining gamiton sa paghimo og lain-laing mga kolor pinaagi sa pag-tune sa filter aron usa lang ka kolor ang makalusot. Ang mga pagsala sa paghinam-hinam moabut sa duha ka panguna nga mga tipo - mga long pass filter ug band pass filter. Ang exciter kasagaran usa ka bandpass filter nga moagi lamang sa mga wavelength nga masuhop sa fluorophore, sa ingon mamenosan ang paghinam-hinam sa ubang mga tinubdan sa fluorescence ug pagbabag sa excitation light sa fluorescence emission band. Sama sa gipakita sa asul nga linya sa numero, ang BP mao ang 460-495, nga nagpasabot nga kini makaagi lamang sa fluorescence sa 460-495nm.
Gibutang kini sulod sa agianan sa kahayag sa usa ka fluorescence microscope ug gisala ang tanang wavelength sa tinubdan sa kahayag gawas sa fluorophore excitation range. Ang filter nga minimum transmission nagdiktar sa kahayag ug kahayag sa mga hulagway. Ang minimum nga 40% nga transmission alang sa bisan unsang excitation filter girekomenda nga ang transmission mao ang labing maayo nga> 85%. Ang bandwidth sa excitation filter kinahanglan nga bug-os sulod sa fluorophore excitation range aron ang center wavelength (CWL) sa filter mao ang duol kutob sa mahimo sa peak excitation wavelength sa fluorophore. Ang excitation filter optical density (OD) nagdiktar sa background nga kangitngit sa hulagway; Ang OD usa ka sukod kung unsa ka maayo ang pag-block sa usa ka filter sa mga wavelength sa gawas sa transmission range o bandwidth. Girekomenda ang minimum nga OD nga 3.0 apan ang OD nga 6.0 o labaw pa maayo.
Pagsala sa Emisyon
Ang mga filter sa emisyon nagsilbi nga katuyoan sa pagtugot sa gitinguha nga fluorescence gikan sa sample nga makaabut sa detector. Gibabagan nila ang mas mubu nga mga wavelength ug adunay taas nga transmission alang sa mas taas nga wavelength. Ang tipo sa filter nalangkit usab sa usa ka numero, eg BA510IF sa numero (interference barrier filter), kana nga pagtawag nagtumong sa wavelength sa 50% sa maximum transmission niini.
Ang parehas nga mga rekomendasyon alang sa mga pagsala sa pagpukaw tinuod alang sa mga pagsala sa emisyon: minimum nga transmission, bandwidth, OD, ug CWL. Ang usa ka filter sa emisyon nga adunay maayo nga CWL, minimum nga transmission, ug kombinasyon sa OD naghatag sa labing hayag nga posible nga mga imahe, nga adunay labing lawom nga posible nga pag-block, ug gisiguro ang pag-ila sa labing hinay nga mga signal sa pagpagawas.
Dichroic Mirror
Ang dichroic nga salamin gibutang sa taliwala sa excitation filter ug emission filter sa 45 ° nga anggulo ug nagpakita sa excitation signal paingon sa fluorophore samtang nagpadala sa emission signal ngadto sa detector. Ang maayo nga dichroic filter ug beam splitters adunay hait nga mga transisyon tali sa maximum reflection ug maximum transmission, nga adunay> 95% nga pagpamalandong alang sa bandwidth sa excitation filter ug usa ka transmission nga> 90% alang sa bandwidth sa emission filter. Pilia ang filter nga naa sa hunahuna ang intersection wavelength (λ) sa fluorophore, aron mamenosan ang stray-light ug ma-maximize ang fluorescent image signal-to-noise ratio.
Ang dichroic nga salamin niini nga numero mao ang DM505, nga ginganlan tungod kay ang 505 nanometer mao ang wavelength sa 50% sa maximum transmission alang niini nga salamin. Ang transmission curve alang niini nga salamin nagpakita sa taas nga transmission sa ibabaw sa 505 nm, usa ka titip nga drop sa transmission sa wala sa 505 nanometer, ug maximum reflectivity sa wala sa 505 nanometers apan sa gihapon adunay pipila ka transmission ubos sa 505 nm.
Unsa ang kalainan tali sa long pass ug band pass filter?
Ang mga filter sa fluorescence mahimong bahinon sa duha ka klase: long pass (LP) ug band pass (BP).
Ang mga long pass filter nagpadala ug taas nga wavelength ug gibabagan ang mas mugbo. Ang cut-on wavelength mao ang bili sa 50% sa peak transmission, ug ang tanang wavelength sa ibabaw sa cut-on gipasa sa long pass filters. Kanunay kini nga gigamit sa mga dichroic nga salamin ug mga filter sa emission. Ang mga filter sa longpass kinahanglan gamiton kung ang aplikasyon nanginahanglan labing taas nga pagkolekta sa emisyon ug kung dili gusto o kinahanglan ang spectral nga diskriminasyon, nga sa kasagaran mao ang kaso sa mga probe nga nagmugna og usa ka espisye nga nagpagawas sa mga specimen nga adunay medyo ubos nga lebel sa background nga autofluorescence.
Ang mga band pass filter nagpasa lamang sa usa ka piho nga wavelength nga banda, ug gibabagan ang uban. Gipakunhod nila ang crosstalk pinaagi sa pagtugot lamang sa pinakalig-on nga bahin sa fluorophore emission spectrum nga mapasa, pagpakunhod sa autofluorescence noise ug sa ingon mapalambo ang signal-to-noise ratio sa taas nga background nga autofluorescence sample, nga dili ikatanyag sa mga long pass filter.
Pila ka klase sa fluorescence filter set ang mahatag sa BestScope?
Ang pipila ka kasagarang mga matang sa mga pagsala naglakip sa asul, berde, ug ultraviolet nga mga pagsala. Ingon sa gipakita sa lamesa.
| Set sa Filter | Filter sa Kahinam | Dichroic Mirror | Barrier Filter | LED lamp nga Wave Length | Aplikasyon |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Fluorescent antibody nga pamaagi · Acidine orange: DNA, RNA · Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Fluorescent antibody nga pamaagi · Propidium iodide: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Auto-fluorescence obserbasyon · DAPI: DNA staining · Hoechest 332528, 33342: gigamit para sa Chromosome staining |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Mga catecholamines · 5-hydroxy tryptamine · Tetracycline: Kalabera, Ngipon |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Ang mga set sa filter nga gigamit sa pagkuha sa fluorescence gidisenyo sa palibot sa mga mayor nga wavelength nga gigamit sa mga aplikasyon sa fluorescence, nga gibase sa palibot sa labing gigamit nga fluorophores. Tungod niini nga rason, sila usab ginganlan sunod sa fluorophore nga sila gituyo alang sa imaging, sama sa DAPI (asul), FITC (berde) o TRITC (pula) filter cubes.
| Set sa Filter | Filter sa Kahinam | Dichroic Mirror | Barrier Filter | LED lamp nga Wave Length |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Pula sa Texas | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Giunsa nimo pagpili ang usa ka fluorescence filter?
1. Ang prinsipyo sa pagpili sa fluorescence filter mao ang pagtugot sa fluorescence/emission light nga moagi sa imaging end kutob sa mahimo, ug hingpit nga babagan ang excitation light sa samang higayon, aron makuha ang pinakataas nga signal-to-noise ratio. Ilabi na alang sa paggamit sa multiphoton excitation ug total internal reflection mikroskopyo, ang huyang nga kasaba mahimo usab nga hinungdan sa dako nga interference sa imaging epekto, mao nga ang gikinahanglan alang sa signal sa kasaba ratio mao ang mas taas.
2. Hibal-i ang eksitasi ug emission spectrum sa fluorophore. Aron makahimo og fluorescence filter set nga makamugna og taas nga kalidad, high-contrast nga hulagway nga adunay itom nga background, excitation ug emission filters kinahanglang makab-ot ang taas nga transmission nga adunay gamay nga passband ripple sa mga rehiyon nga katumbas sa fluorophore excitation peaks o emissions.
3. Hunahunaa ang kalig-on sa fluorescence filter. Kini nga mga filter kinahanglan nga dili matupngan sa grabe nga mga tinubdan sa kahayag nga makamugna og ultraviolet (UV) nga kahayag nga mahimong mosangpot sa "burnout", ilabi na sa exciter filter tungod kay kini gipailalom sa bug-os nga intensity sa tinubdan sa kahayag.
Ang Lahi nga Fluorescent Sample nga mga Imahe
Ang mga kapanguhaan gikolekta ug giorganisar sa Internet, ug gigamit lamang alang sa pagkat-on ug komunikasyon. Kung adunay bisan unsang paglapas, palihug kontaka kami aron mapapas.
Oras sa pag-post: Dis-09-2022